Inhibition of mouse and rat lymphoproliferation by gangliosides

Our previous study have demonstrated that Glycosphingolipids (GSLs) have an immunosuppressive effect on murine lymphoproliferation and IL-2 production. In the present study we examined the effect of a pool of Gangliosides (Gang) on spleen lymphocyte proliferation from either isogeneic strains of Wistar rats or BALB/c mice. Two hundred-fifty grams adult female isogeneic Wistar rats and 8-week-old BALB/c mice were used. The animals were sacrificed and the spleen harvested aseptically for cellular assays. Spleen cells suspensions were obtained by homogenization in RPMI 1640 with a loose tissue grinder. After washing, the cells were suspended in RPMI 1640 supplemented. Cell viability was measured by Trypan blue exclusion. Cells were cultured in triplicate using increasing concentrations of Gang (1; 2; 5; 10; 15; 20 mug/well) and in the presence of Concanavalin A. The cells were incubated for 48 hours and were pulsed with [³H] thymidine 18 hours prior to harvesting on glass fiber paper for counting in a beta-counter. Data were presented as rate of inhibition, as previously described. At concentrations 1 and 2 mug/well, Gang stimulated lymphoproliferation (30% and 50%, rats and mice respectively), while at concentration from 5 to 20 mug/well an increasing inhibition was observed for spleen cells from both mouse and rat (from 40% up to 80%). In preliminary studies we observed inhibition of mixed lymphocyte reaction on spleen cells from rats treated with Gang for 10 days (data not shown). Our data suggest that Gang may be investigated as a immunosuppressive drug in organ transplantation.

Efeito imunossupressor dos gangliosídeos: estudo "in vivo"

Imunomodulação mais específica e eficaz é uma meta importante a ser atingida na área de órgão. Neste sentido, foi estudado previamente o papel imunomodulador dos gangliosídeos "in vitro". No presente trabalho objetivou-se avaliar este efeito agora "in vivo", mimetizando a situação do transplante alogênico. Foram utilizados 26 ratos Wistar 1 EPM, machos, com 3 meses de idade, pesando cerca de 250g, procedentes do Centro de Desenvolvimento de Pesquisa Experimental em Medicina e Biologia. Os animais fora mantidos por 5 dias, para adaptação, no biotério setorial da Disciplina de Técnica Operatória e Cirurgia Experimental da UNIFESP-EPM, recebendo água e ração própria para a espécie. Os animais foram distribuídos em grupos conforme segue: grupos experimento (que receberam 1, 3 e 6 mg/kg/dia de gangliosídeos) e um grupo controle que recebeu veículo, todos por via intramuscular durante 7 dias consecutivos. No 8º dia, com os animais anestesiados com éter etílico foi feita a remoção cirúrgica do baço de todos os animais, os quais foram sacrificados por exsanguinação, ainda sob efeito anestésico. Os baços removidos foram processados para a obtenção de linfócitos os quais foram cultivados em placa de cultura com 96 poços, distribuídos da seguinte forma: 1,5x10(5) linfócitos viáveis de cada animal dos grupos experimento e controle foram cultivados com 1,5x10(5) linfócitos viáveis de um rato não tratado, sendo assim realizada a reação mista de linfócitos. Os linfócitos provenientes dos animais dos grupos controle e 1 mg apresentaram aumento da proliferação sem nenhuma alteração. Por outro lado, foi observada uma taxa de inibição ao redor de 70% sobre a proliferação linfocitária dos animais dos grupos 3 e 6 mg comparados aos animais dos grupos controle e 1 mg. O resultado desta investigação estimula a utilização dos gangliosídeos no tratamento da rejeição alogênica.

Gangliosideos - estudo do colágeno e da resposta inflamatória no processo cicatricial

Objetivo: Investigar o efeito dos gangliosídeos sobre a infiltração seqüencial de leucócitos e fibroblastos durante o processo de cicatrização usando um modelo de cicatrização da pele em ratos. Método: Foram utilizados 12 ratas EPM - 1 Wistar, com peso médio de 200 gramas e 4 meses de idade. Os animais procederam do Centro de Desenvolvimento de Pesquisa Experimental em Medicina e Biologia e foram mantidos por 5 dias para adaptação no biotério setorial da disciplina de Técnica Operatória e Cirurgia Experimental da UNIFESP-EPM, recebendo água e ração própria para a espécie. O protocolo anestésico utilizado foi uma associação de Cetamina (60mg.kg-1) e Xilazina (10mg.kg-1), por via intramuscular. Em seguida, realizava-se uma incisão longitudinal com 7 cm de extensão, na região dorsal paravertebral, interessando pele e tela subcutânea que foi fechada com pontos separados, com fio de prolene 7-0 e agulha triangular. As ratas foram distribuídas em dois grupos a saber: grupo experimento, que recebeu 3mg.kg-1.dia-1 de gangliosídeos, e um grupo controle, que recebeu veículo, ambos por via intramuscular durante 14 dias consecutivos. No 7º e 14º dias de pós-operatório foram ressecados fragmentos da pele e tela subcutânea para análise histológica, com a coloração de Tricrômio de Masson e Hematoxilina - Eosina. Resultados: As amostras apresentaram a mesma quantidade de colágeno em ambos os grupos mostrando que não houve inibição dos fibroblastos. Entretanto, a infiltração leucocitária foi retardada no grupo experimento quando comparado ao grupo controle. Conclusão: A alteração encontrada no processo cicatricial foi devida a um retardo na resposta inflamatória e não a uma inibição fibroblastos.

Estudo da transmigração bacteriana na apendicite experimental em coelhos

The present study aims to evaluate the occurrence of the bacterial transmigration in induced ezxperimental appendicitis in rabbitis through complete oclusion of the vermiform appendix. 24 New Zealand white rabbits with a body weight ranging from 2500 to 3000 grams were used. They were divided into 2 groups. The animals from group I were submitted to a median laparotomy and fragments from the spleen, left kidney, right lung, abdominal limphonode, light content from the vermiform appendix and blood from the portal vein were withdrawn for culture. The animals from group 2 were submitted to median laparotomy and complete occlusion of the vermiform appendix in order to induce appendicitis and, after 24 hours, material was collected following the steps of group 1. It was not observed an increase in bacteria in the samples analysed in the Control Group Group 1). The increase of Escherichia coli was observed in all the animals from the Experiment Group (Group 2). The bacterial transmigration occured after 24-hour observation in rabbits with experimental appendicitis.

Introdução: A queda extrínseca dos mecanismos de defesa de um hospedeiro é vista classicamente como uma infecção, que resulta na aquisição de um tecido normal, de um novo microorganismo, cuja virulência é fundamental para a sua patogenia.Na década de 50, estudos comprovaram que bactérias e endotoxinas podem ultrapassar a barreira intestinal e atingir a circulação, demonstrando ainda, que a flora intestinal representa uma importante fonte para o desenvolvimento da infecção sistêmica. Objetivo: o presente estudo visa avaliar a ocorrência de transmigração bacteriana em apendicite experimental induzida em coelhos, mediante a oclusão completa do apêndice vermiforme. Métodos: foram utilizados 24 coelhos brancos, da linhagem Nova Zelândia, com peso corporal variando de 2500 a 3000 gramas, sendo então divididos em 2 grupos. Os animais do Grupo I foram submetidos a laparotomia mediana e retirada de fragmentos do baço, rim esquerdo, pulmão direito, linfonodo abdominal, conteúdo da luz do apêndice vermiforme e sangue da veia porta para cultura. Os animais do Grupo II foram submetidos a laparotomia mediana e oclusão completa do apêndice vermiforme para a indução de apendicite e, após 24 horas, realizada a coleta do material nos moldes do Grupo I. Resultados: No Grupo controle (Grupo I), não se observou o crescimento de bactérias nas amostras analisadas. No Grupo experimento (Grupo II), observou-se o crescimento de Escherichia coli em todos os animais. Conclusão: Ocorreu transmigração bacteriana após 24 horas de observação em coelhos com apendicite experimental.